PCR最新技術(shù)原理、方法及應(yīng)用（第三版）

第一章緒論001
第一節(jié)PCR發(fā)展簡史001
第二節(jié)PCR技術(shù)的基本原理和操作002
一、PCR的基本原理002
二、PCR的基本成分002
三、PCR的基本操作005
第三節(jié)PCR的主要應(yīng)用006
一、基礎(chǔ)研究方面的應(yīng)用006
二、臨床上的應(yīng)用007
三、在法醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用008
四、在其它方面的應(yīng)用008
參考文獻(xiàn)009

第二章擴(kuò)增已知序列兩側(cè)DNA的PCR011
第一節(jié)反向PCR011
一、引言011
二、基本原理011
三、材料012
四、方法013
五、注意事項014
六、應(yīng)用015
七、小結(jié)017
第二節(jié)錨定PCR018
一、引言018
二、原理018
三、用連接錨定PCR從基因文庫中擴(kuò)增已知基因側(cè)翼序列020
四、用互補錨定PCR直接擴(kuò)增已知序列側(cè)翼cDNA序列021
五、問題及對策025
六、小結(jié)026
第三節(jié)RACE——cDNA末端的快速擴(kuò)增027
一、引言027
二、RACE基本原理028
三、實驗方案030
四、RACE的應(yīng)用033
五、小結(jié)034
第四節(jié)連接介導(dǎo)的PCR034
一、引言034
二、原理034
三、材料035
四、操作步驟035
五、注意事項038
六、應(yīng)用039
七、小結(jié)042
第五節(jié)Bubble-PCR042
一、引言042
二、原理042
三、材料與方法043
四、注意事項044
五、應(yīng)用045
六、小結(jié)045
參考文獻(xiàn)045

第三章巢式PCR048
第一節(jié)常規(guī)巢式PCR048
一、引言048
二、原理048
三、材料049
四、方法049
五、注意事項050
六、應(yīng)用與小結(jié)050
第二節(jié)半巢式PCR050
一、引言050
二、材料050
三、方法051
四、注意事項051
五、應(yīng)用與小結(jié)052
第三節(jié)反轉(zhuǎn)錄巢式PCR052
一、引言052
二、材料052
三、方法052
四、注意事項054
五、應(yīng)用054
第四節(jié)共有序列巢式PCR054
一、引言054
二、材料055
三、方法055
四、注意事項056
五、應(yīng)用與小結(jié)056
第五節(jié)種特異巢式PCR056
一、引言056
二、材料057
三、方法057
四、注意事項058
五、應(yīng)用與小結(jié)058
第六節(jié)巢式PCR-變性梯度凝膠電泳058
一、引言058
二、材料059
三、方法059
四、注意事項060
五、應(yīng)用與小結(jié)060
第七節(jié)巢式PCR-限制性片段長度多態(tài)性061
一、引言061
二、材料061
三、方法062
四、注意事項063
五、應(yīng)用與小結(jié)063
參考文獻(xiàn)063

第四章實時熒光定量PCR065
第一節(jié)實時熒光定量PCR原理065
一、引言065
二、概念及原理065
第二節(jié)實時熒光定量PCR中的熒光化學(xué)物質(zhì)067
一、引言067
二、熒光染料067
三、水解探針068
四、分子信標(biāo)069
五、雙雜交探針071
六、復(fù)合探針071
第三節(jié)實時熒光定量PCR的定量方法072
一、絕對定量072
二、相對定量073
第四節(jié)實時熒光定量PCR的實驗方法076
一、實時熒光定量PCR076
二、實時定量RT-PCR079
三、多重實時定量PCR081
四、多重實時定量RT-PCR084
五、實驗方案的優(yōu)化086
六、實踐中應(yīng)注意的問題087
第五節(jié)實時熒光定量PCR技術(shù)的應(yīng)用088
一、在病原體檢測中的應(yīng)用089
二、在腫瘤研究中的應(yīng)用090
三、在基因表達(dá)研究中的應(yīng)用092
四、在細(xì)胞因子表達(dá)分析中的應(yīng)用092
五、在遺傳學(xué)及SNP分析上的應(yīng)用092
六、小結(jié)093
參考文獻(xiàn)094

第五章致突變PCR097
第一節(jié)利用易錯DNA聚合酶進(jìn)行隨機突變098
一、原理098
二、實驗方案098
三、注意事項100
四、討論100
五、應(yīng)用101
第二節(jié)利用PCR引物構(gòu)建位點特異突變體102
一、方法1：利用重疊延伸PCR構(gòu)建定點突變體102
二、方法2：利用大引物PCR構(gòu)建定點突變體105
三、方法3：利用重組PCR進(jìn)行掃描突變107
四、討論111
五、應(yīng)用112
六、小結(jié)113
參考文獻(xiàn)113

第六章測定基因突變的PCR115
第一節(jié)多重PCR115
一、引言115
二、原理116
三、材料116
四、方法116
五、常見問題的解決120
六、應(yīng)用121
七、小結(jié)128
第二節(jié)常用的等位基因特異性PCR128
一、引言128
二、原理129
三、材料130
四、方法130
五、注意事項131
六、對等位基因特異PCR的改進(jìn)131
七、應(yīng)用與小結(jié)132
第三節(jié)簡單等位基因辨別PCR133
一、引言133
二、原理133
三、材料134
四、方法135
五、注意事項136
六、應(yīng)用與小結(jié)136
第四節(jié)L-DNA標(biāo)記的等位基因特異性PCR136
一、引言136
二、原理137
三、材料137
四、方法138
五、注意事項139
六、應(yīng)用與小結(jié)139
第五節(jié)同源一步熒光等位基因特異性PCR139
一、引言139
二、原理139
三、材料140
四、方法141
五、注意事項142
六、應(yīng)用與小結(jié)142
第六節(jié)低溫變性共擴(kuò)增PCR142
一、引言142
二、原理143
三、材料144
四、方法144
五、小結(jié)145
第七節(jié)限制性片段長度多態(tài)性PCR145
一、原理145
二、材料145
三、操作方法146
四、注意事項147
五、應(yīng)用148
第八節(jié)PCR-變性梯度凝膠電泳149
一、原理149
二、材料149
三、操作方法149
四、注意事項151
五、應(yīng)用151
參考文獻(xiàn)152