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內(nèi)容簡(jiǎn)介

　　《脂肪酸脫飽和酶的表達(dá)純化及其功能活性研究》設(shè)計(jì)克隆ω3脂肪酸去飽和酶-Δ17去飽和酶（Δ17FAD）基因，研究分析Δ17FAD及去掉跨膜結(jié)構(gòu)的Δ17FAD（NT）基因?qū)Ρ磉_(dá)效率及酶活的影響，探討基因的輔助區(qū)結(jié)構(gòu)改變對(duì)酶——底物特異性及功能變化的機(jī)制。通過(guò)甲醇誘導(dǎo)實(shí)現(xiàn)在畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)中有效表達(dá)，純化獲取ω3脂肪酸去飽和酶，為商業(yè)化生產(chǎn)新型、高價(jià)值的重要脂肪酸提供科學(xué)依據(jù)，也為研究ω3膜蛋白的高級(jí)結(jié)構(gòu)奠定重要基礎(chǔ)。近年來(lái)的研究也表明，部分多不飽和脂肪酸及其代謝產(chǎn)物對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞有保護(hù)作用，這為內(nèi)皮細(xì)胞損傷保護(hù)提供了研究方向。而氧化低密度脂蛋白可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡并加速動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展，導(dǎo)致了動(dòng)脈粥樣硬化后期的斑塊破裂。內(nèi)皮細(xì)胞的損傷及凋亡意味著內(nèi)皮功能的紊亂，減緩內(nèi)皮細(xì)胞損傷及維持內(nèi)皮細(xì)胞功能正常，增強(qiáng)其對(duì)有害因子的抵抗力和耐受性，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的防治非常關(guān)鍵。因此，《脂肪酸脫飽和酶的表達(dá)純化及其功能活性研究》通過(guò)在血管內(nèi)皮細(xì)胞中過(guò)表達(dá)低等生物的ω3去飽和酶基因比如Δ17（ω3）脂肪酸去飽和酶基因，將細(xì)胞內(nèi)過(guò)多ω6多不飽和脂肪酸或者飽和脂肪酸催化轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的ω3多不飽和脂肪酸，引導(dǎo)ω6/ω3多不飽和脂肪酸比例的平衡，從而探討脂肪酸脫飽和酶的抗氧化作用及其對(duì)損傷細(xì)胞的修復(fù)作用，為防治心血管疾病如動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生奠定理論基礎(chǔ)。

作者簡(jiǎn)介

暫缺《脂肪酸脫飽和酶的表達(dá)純化及其功能活性研究》作者簡(jiǎn)介

圖書目錄

前言
第一章緒論
第一節(jié) 多不飽和脂肪酸的概述
一、多不飽和脂肪酸簡(jiǎn)介
二、多不飽和脂肪酸來(lái)源
三、多不飽和脂肪酸的生物合成途徑
四、ω3多不飽和脂肪酸功能性
第二節(jié) 脂肪酸合成的關(guān)鍵酶——脂肪酸去飽和酶的概述
一、脂肪酸去飽和酶分類及結(jié)構(gòu)
二、ω3脂肪酸去飽和酶基因
三、ω3脂肪酸去飽和酶的研究進(jìn)展
第三節(jié) 血管內(nèi)皮細(xì)胞的概述
一、內(nèi)皮細(xì)胞與動(dòng)脈粥樣硬化
二、血管內(nèi)皮細(xì)胞生理功能
三、血管內(nèi)皮損傷機(jī)制
四、內(nèi)皮細(xì)胞損傷檢測(cè)標(biāo)志物
五、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞的因素
第二章 Δ17脂肪酸去飽和酶的克隆及表達(dá)
第一節(jié) 研究材料與方法概論
一、材料
二、實(shí)驗(yàn)方法
第二節(jié) Δ17脂肪酸去飽和酶全長(zhǎng)基因及無(wú)跨膜結(jié)構(gòu)基因的克隆及表達(dá)
一、Δ17FAD基因跨膜結(jié)構(gòu)分析
二、脂肪酸去飽和酶Δ17FAD及Δ17FAD（NT）密碼子優(yōu)化及偏性分析
三、重組載體pPICZαA-Δ17FAD及pPICZαA-Δ17FAD（NT）的構(gòu)建
四、重組載體pPICZαA-Δ17FAD及pPICZαA-Δ17FAD（NT）的酶切驗(yàn)證
五、畢赤酵母重組子的PCR鑒定
六、畢赤酵母重組蛋白表達(dá)鑒定
第三節(jié) 結(jié)果與討論
第三章基因結(jié)構(gòu)改變對(duì)脂肪酸脫飽和酶功能活性影響
第一節(jié) 研究材料與方法概論
一、材料
二、實(shí)驗(yàn)方法
第二節(jié) Δ17脂肪酸去飽和酶的純化及功能驗(yàn)證
一、Δ17脂肪酸去飽和酶的純化及質(zhì)量檢驗(yàn)
二、Δ17脂肪酸去飽和酶活性驗(yàn)證
第三節(jié) 結(jié)果與討論
第四章穩(wěn)定表達(dá)脂肪酸去飽和酶的細(xì)胞株的構(gòu)建及功能驗(yàn)證
第一節(jié) 研究材料與方法概論
一、材料
二、實(shí)驗(yàn)方法
第二節(jié) 穩(wěn)定表達(dá)Δ17脂肪酸去飽和酶的HUVEC細(xì)胞株的構(gòu)建及功能驗(yàn)證
一、慢病毒重組載體的構(gòu)建及病毒顆粒滴度檢驗(yàn)
二、慢病毒轉(zhuǎn)染HUVEC細(xì)胞的熒光鑒定
三、Real-time PCR檢測(cè)慢病毒感染效率
四、Δ17FAD表達(dá)對(duì)HUVEC細(xì)胞脂肪酸組成的影響
第三節(jié) 結(jié)果與討論
一、穩(wěn)定高表達(dá)Δ17FAD的載體的選擇
二、過(guò)表達(dá)Δ17FAD在HUVEC細(xì)胞中功能驗(yàn)證
第五章 Δ17脂肪酸去飽和酶對(duì)HUVEC增殖凋亡及抗氧化應(yīng)激的影響
第一節(jié) 研究材料與方法概論
一、材料
二、實(shí)驗(yàn)方法
第二節(jié) Δ17脂肪酸去飽和酶對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖凋亡及抗氧化應(yīng)激的影響
一、Real-time PCR檢測(cè)HUVEC細(xì)胞中Δ17FAD相對(duì)表達(dá)量
二、MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖
三、流式細(xì)胞儀檢測(cè)HUVEC細(xì)胞凋亡
四、HUVEC細(xì)胞氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測(cè)
第三節(jié) 結(jié)果與討論
一、Δ17FAD對(duì)HUVEC凋亡的影響
二、Δ17FAD對(duì)HUVEC抗氧化應(yīng)激的影響
第六章 Δ17脂肪酸去飽和酶對(duì)損傷內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)機(jī)制的探討
第一節(jié) 研究材料與方法概論
一、材料
二、實(shí)驗(yàn)方法
第二節(jié) Δ17脂肪酸去飽和酶對(duì)損傷內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)機(jī)制的探討
一、Δ17FAD對(duì)細(xì)胞分泌TNF-α、IL-6及ICAM-1水平的影響
二、Δ17FAD對(duì)血管舒張因子NO及內(nèi)皮一氧化氮合酶eNOS的影響
三、Δ17FAD調(diào)控細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Caspase-3的表達(dá)
第三節(jié) 結(jié)果與討論
一、Δ17FAD通過(guò)調(diào)節(jié)炎癥及黏附因子的表達(dá)來(lái)修復(fù)損傷HUVEC
二、Δ17FAD通過(guò)調(diào)控ENOS/NO通路修復(fù)損傷HUVEC
三、Δ17FAD通過(guò)調(diào)控凋亡相關(guān)蛋白來(lái)抑制HUVEC凋亡
參考文獻(xiàn)