脂肪酸脫飽和酶的表達(dá)純化及其功能活性研究

前言
第一章 緒論
第一節(jié) 多不飽和脂肪酸的概述
一、多不飽和脂肪酸簡介
二、多不飽和脂肪酸來源
三、多不飽和脂肪酸的生物合成途徑
四、ω3多不飽和脂肪酸功能性
第二節(jié) 脂肪酸合成的關(guān)鍵酶——脂肪酸去飽和酶的概述
一、脂肪酸去飽和酶分類及結(jié)構(gòu)
二、ω3脂肪酸去飽和酶基因
三、ω3脂肪酸去飽和酶的研究進(jìn)展
第三節(jié) 血管內(nèi)皮細(xì)胞的概述
一、內(nèi)皮細(xì)胞與動脈粥樣硬化
二、血管內(nèi)皮細(xì)胞生理功能
三、血管內(nèi)皮損傷機(jī)制
四、內(nèi)皮細(xì)胞損傷檢測標(biāo)志物
五、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞的因素
第二章 Δ17脂肪酸去飽和酶的克隆及表達(dá)
第一節(jié) 研究材料與方法概論
一、材料
二、實驗方法
第二節(jié) Δ17脂肪酸去飽和酶全長基因及無跨膜結(jié)構(gòu)基因的克隆及表達(dá)
一、Δ17FAD基因跨膜結(jié)構(gòu)分析
二、脂肪酸去飽和酶Δ17FAD及Δ17FAD（NT）密碼子優(yōu)化及偏性分析
三、重組載體pPICZαA-Δ17FAD及pPICZαA-Δ17FAD（NT）的構(gòu)建
四、重組載體pPICZαA-Δ17FAD及pPICZαA-Δ17FAD（NT）的酶切驗證
五、畢赤酵母重組子的PCR鑒定
六、畢赤酵母重組蛋白表達(dá)鑒定
第三節(jié) 結(jié)果與討論
第三章 基因結(jié)構(gòu)改變對脂肪酸脫飽和酶功能活性影響
第一節(jié) 研究材料與方法概論
一、材料
二、實驗方法
第二節(jié) Δ17脂肪酸去飽和酶的純化及功能驗證
一、Δ17脂肪酸去飽和酶的純化及質(zhì)量檢驗
二、Δ17脂肪酸去飽和酶活性驗證
第三節(jié) 結(jié)果與討論
第四章 穩(wěn)定表達(dá)脂肪酸去飽和酶的細(xì)胞株的構(gòu)建及功能驗證
第一節(jié) 研究材料與方法概論
一、材料
二、實驗方法
第二節(jié) 穩(wěn)定表達(dá)Δ17脂肪酸去飽和酶的HUVEC細(xì)胞株的構(gòu)建及功能驗證
一、慢病毒重組載體的構(gòu)建及病毒顆粒滴度檢驗
二、慢病毒轉(zhuǎn)染HUVEC細(xì)胞的熒光鑒定
三、Real-time PCR檢測慢病毒感染效率
四、Δ17FAD表達(dá)對HUVEC細(xì)胞脂肪酸組成的影響
第三節(jié) 結(jié)果與討論
一、穩(wěn)定高表達(dá)Δ17FAD的載體的選擇
二、過表達(dá)Δ17FAD在HUVEC細(xì)胞中功能驗證
第五章 Δ17脂肪酸去飽和酶對HUVEC增殖凋亡及抗氧化應(yīng)激的影響
第一節(jié) 研究材料與方法概論
一、材料
二、實驗方法
第二節(jié) Δ17脂肪酸去飽和酶對內(nèi)皮細(xì)胞增殖凋亡及抗氧化應(yīng)激的影響
一、Real-time PCR檢測HUVEC細(xì)胞中Δ17FAD相對表達(dá)量
二、MTT檢測細(xì)胞增殖
三、流式細(xì)胞儀檢測HUVEC細(xì)胞凋亡
四、HUVEC細(xì)胞氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測
第三節(jié) 結(jié)果與討論
一、Δ17FAD對HUVEC凋亡的影響
二、Δ17FAD對HUVEC抗氧化應(yīng)激的影響
第六章 Δ17脂肪酸去飽和酶對損傷內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)機(jī)制的探討
第一節(jié) 研究材料與方法概論
一、材料
二、實驗方法
第二節(jié) Δ17脂肪酸去飽和酶對損傷內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)機(jī)制的探討
一、Δ17FAD對細(xì)胞分泌TNF-α、IL-6及ICAM-1水平的影響
二、Δ17FAD對血管舒張因子NO及內(nèi)皮一氧化氮合酶eNOS的影響
三、Δ17FAD調(diào)控細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Caspase-3的表達(dá)
第三節(jié) 結(jié)果與討論
一、Δ17FAD通過調(diào)節(jié)炎癥及黏附因子的表達(dá)來修復(fù)損傷HUVEC
二、Δ17FAD通過調(diào)控ENOS/NO通路修復(fù)損傷HUVEC
三、Δ17FAD通過調(diào)控凋亡相關(guān)蛋白來抑制HUVEC凋亡
參考文獻(xiàn)