生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程（第二版）

第一篇生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)


第1章生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本知識(shí)(3)


1.1實(shí)驗(yàn)室規(guī)范(3)


1.2玻璃儀器(6)


1.3生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)常用儀器(11)

第2章生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本要求(19)


2.1實(shí)驗(yàn)樣品的制備(19)

2.2實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性與誤差(24)

2.3實(shí)驗(yàn)記錄和實(shí)驗(yàn)報(bào)告(26)

第3章生物化學(xué)基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)(28)


3.1層析技術(shù)(28)

3.2電泳技術(shù)(36)

3.3離心技術(shù)(42)

3.4膜分離技術(shù)(49)

3.5光譜學(xué)技術(shù)(53)

3.6其他生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)(62)


第二篇生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)

第4章蛋白質(zhì)(73)

實(shí)驗(yàn)1氨基酸和蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)(73)

實(shí)驗(yàn)2蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的測(cè)定和沉淀反應(yīng)(77)

實(shí)驗(yàn)3血清蛋白鹽析及分子篩層析脫鹽(79)

實(shí)驗(yàn)4蛋白質(zhì)含量的測(cè)定(81)

Ⅰ雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)含量(81)

Ⅱ考馬斯亮藍(lán)結(jié)合法(Bradford法)測(cè)定蛋白質(zhì)含量(83)

Ⅲ紫外光吸收法測(cè)定蛋白質(zhì)含量(85)

Ⅳ微量凱氏定氮法測(cè)定總蛋白含量(86)

ⅤFolin酚法測(cè)定蛋白質(zhì)含量(88)

實(shí)驗(yàn)5氨基酸的分離鑒定(90)

Ⅰ紙層析分離鑒定氨基酸(90)

Ⅱ離子交換層析分離混合氨基酸(91)

實(shí)驗(yàn)6血清蛋白的醋酸纖維素薄膜電泳(93)

實(shí)驗(yàn)7DNS氨基酸的制備和鑒定(95)

實(shí)驗(yàn)8DNP氨基酸的制備和鑒定(98)

實(shí)驗(yàn)9用DNS法鑒定蛋白質(zhì)或多肽的N端氨基酸(100)

實(shí)驗(yàn)10SDS聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳分離細(xì)菌總蛋白質(zhì)(102)

實(shí)驗(yàn)11SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)定蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量(104)

實(shí)驗(yàn)12牛乳中蛋白質(zhì)的提取與鑒定(108)

實(shí)驗(yàn)13大豆蛋白的提取與含量測(cè)定(109)

實(shí)驗(yàn)14葡聚糖凝膠層析法分離純化蛋白質(zhì)(111)

第5章核酸(114)

實(shí)驗(yàn)15核酸含量的測(cè)定(114)

Ⅰ定磷法定量測(cè)定核酸(114)

Ⅱ地衣酚法定量測(cè)定RNA(116)

Ⅲ二苯胺法測(cè)定DNA含量(117)


實(shí)驗(yàn)16過碘酸氧化法定量測(cè)定核苷酸(118)

實(shí)驗(yàn)17酵母核糖核酸的分離及組分鑒定(121)

實(shí)驗(yàn)18菜花(花椰菜)中核酸的分離和鑒定(123)

實(shí)驗(yàn)19動(dòng)物肝臟中DNA的提取(125)

實(shí)驗(yàn)20堿裂解法小量提取質(zhì)粒DNA(127)

實(shí)驗(yàn)21DNA瓊脂糖凝膠電泳(128)


實(shí)驗(yàn)22AMP、ADP和ATP的分離(130)

Ⅰ薄層層析分離AMP、ADP和ATP(130)

Ⅱ醋酸纖維素薄膜電泳鑒定AMP、ADP、ATP(132)

第6章酶學(xué)(134)


實(shí)驗(yàn)23酶的特性實(shí)驗(yàn)(134)

實(shí)驗(yàn)24米氏常數(shù)測(cè)定(135)

Ⅰ脲酶米氏常數(shù)的簡易測(cè)定(135)

Ⅱ過氧化氫酶米氏常數(shù)的測(cè)定(137)

Ⅲ胰蛋白酶米氏常數(shù)的測(cè)定(139)

實(shí)驗(yàn)25酶活力的測(cè)定(140)

Ⅰ液化型淀粉酶活力的測(cè)定(140)

Ⅱ薄層層析法鑒定轉(zhuǎn)氨酶活性(142)

Ⅲ分光光度法測(cè)定血液中轉(zhuǎn)氨酶的活力(143)

實(shí)驗(yàn)26酶的制備(146)

Ⅰ乳酸脫氫酶粗提液的制備及活力測(cè)定(146)

Ⅱ枯草桿菌堿性磷酸酶的制備及酶活力的測(cè)定(147)

Ⅲ馬鈴薯多酚氧化酶的制備及性質(zhì)實(shí)驗(yàn)(150)

實(shí)驗(yàn)27酶的固定化及對(duì)酶活性的影響(152)

實(shí)驗(yàn)28琥珀酸脫氫酶競(jìng)爭性抑制(154)

實(shí)驗(yàn)29蔗糖酶相對(duì)分子質(zhì)量的測(cè)定(SDSPAGE電泳法)(156)

第7章維生素和輔酶(159)

實(shí)驗(yàn)30紫外分光光度法測(cè)定魚肝油中維生素A的含量(159)

實(shí)驗(yàn)31食物中脂溶性維生素含量分析(高效液相色譜)(160)

實(shí)驗(yàn)32維生素B1的定性測(cè)定(163)


實(shí)驗(yàn)33維生素B1的含量測(cè)定(164)

實(shí)驗(yàn)34熒光光度法測(cè)定維生素B2的含量(166)

實(shí)驗(yàn)35測(cè)定維生素C的含量(167)

Ⅰ2，6二氯酚靛酚滴定法測(cè)定維生素C的含量(167)

Ⅱ銅離子氧化法測(cè)定維生素C的含量(169)

Ⅲ磷鉬酸法測(cè)定維生素C的含量(170)

實(shí)驗(yàn)36輔酶Q10的制備和檢測(cè)(172)

實(shí)驗(yàn)37分離層析儀分離核黃素和血紅蛋白(174)

第8章生物能學(xué)和物質(zhì)代謝(177)

實(shí)驗(yàn)38丙酮酸含量的測(cè)定(分光光度法)(177)

實(shí)驗(yàn)39發(fā)酵過程中無機(jī)磷的利用(178)

實(shí)驗(yàn)40肌糖原酵解作用(179)

實(shí)驗(yàn)41糖酵解中間產(chǎn)物的鑒定(181)

實(shí)驗(yàn)42脂肪酸的β氧化(182)

實(shí)驗(yàn)432,6二氯酚靛酚顯色反應(yīng)測(cè)定電子傳遞(184)

實(shí)驗(yàn)44乳酸脫氫酶的遞氫作用(186)

實(shí)驗(yàn)45氨基移換反應(yīng)(187)

第9章綜合性實(shí)驗(yàn)(190)

實(shí)驗(yàn)46糖的顏色反應(yīng)(190)

ⅠMolisch反應(yīng)鑒定醛糖(190)

ⅡSeliwanoff反應(yīng)鑒定酮糖(191)

ⅢTollen反應(yīng)鑒定戊糖(192)

實(shí)驗(yàn)47血糖含量的測(cè)定(193)

ⅠFolinWu法測(cè)定血糖含量(193)

ⅡFolinMalmors法測(cè)定血糖含量(194)

Ⅲ鄰甲苯胺法測(cè)定血糖含量(196)

ⅣGODPAP法測(cè)定血糖含量(198)

實(shí)驗(yàn)48總糖和還原糖含量的測(cè)定(199)

Ⅰ蒽酮比色法測(cè)定糖的含量(199)

Ⅱ斐林試劑比色法測(cè)定糖的含量(201)

Ⅲ3,5二硝基水楊酸比色法測(cè)定糖的含量(203)

實(shí)驗(yàn)49脂類的測(cè)定(206)

Ⅰ索氏抽提法測(cè)定粗脂肪含量(206)

Ⅱ脂肪酸的測(cè)定(207)

Ⅲ血清甘油三酯簡易測(cè)定法(208)

Ⅳ醋酸酐法測(cè)定血清中膽固醇含量(210)

實(shí)驗(yàn)50天然產(chǎn)物中多糖的分離、純化與鑒定(211)

Ⅰ多糖的提取、純化(211)

Ⅱ多糖的鑒定(212)

實(shí)驗(yàn)51血清蛋白的分離、純化與鑒定(214)

實(shí)驗(yàn)52凝膠層析法分離純化脲酶(217)

實(shí)驗(yàn)53小麥萌發(fā)前、后淀粉酶活力的比較(220)

實(shí)驗(yàn)54質(zhì)粒DNA的分離、純化及鑒定(222)

實(shí)驗(yàn)55多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)擴(kuò)增目的基因片段(225)

實(shí)驗(yàn)56重組質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化(227)

實(shí)驗(yàn)57感受態(tài)細(xì)胞的制備及轉(zhuǎn)化(230)

實(shí)驗(yàn)58DNA的酶切分析(231)

實(shí)驗(yàn)59植物總黃酮的提取與測(cè)定(233)

實(shí)驗(yàn)60蘆薈中活性成分的提取和純化(234)

Ⅰ蘆薈苷的提取和純化(234)

Ⅱ高速逆流色譜法分離蘆薈苷粗提物(236)

第10章設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)(240)

實(shí)驗(yàn)61半定量RTPCR檢測(cè)基因的表達(dá)差異(240)

實(shí)驗(yàn)62卵磷脂的提取和鑒定(242)

實(shí)驗(yàn)63強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂在廢水處理中的應(yīng)用(244)

實(shí)驗(yàn)64轉(zhuǎn)基因植物的PCR鑒定(246)

實(shí)驗(yàn)65卵黃高磷蛋白的提取(247)

附錄(251)

附錄A緩沖液的配制(251)

附錄B常用實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表(256)

附錄C硫酸銨飽和度常用表(261)

附錄D層析技術(shù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)(262)

參考文獻(xiàn)(265)