分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)

第1章　核酸分離提取技術(shù)1
引言1
第1節(jié)堿裂解法提取質(zhì)粒DNA1
第2節(jié)磁珠法提取質(zhì)粒DNA4
第3節(jié)質(zhì)粒DNA瓊脂糖凝膠電泳及其膠回收7
第4節(jié)E.coli基因組DNA的提取10
第5節(jié)RNA的分離提取14
參考文獻(xiàn)18

第2章　PCR及實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)19
引言19
第1節(jié)DNA序列的PCR擴(kuò)增19
第2節(jié)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)測定目標(biāo)DNA含量24
參考文獻(xiàn)40

第3章　基因工程菌的構(gòu)建與表達(dá)產(chǎn)物鑒定技術(shù)41
引言41
第1節(jié)E.coli感受態(tài)細(xì)胞的制備、質(zhì)粒DNA重組與轉(zhuǎn)化41
第2節(jié)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質(zhì)45
第3節(jié)蛋白質(zhì)的Western印跡分析50
參考文獻(xiàn)56

第4章　基因工程蛋白的工程化生產(chǎn)技術(shù)57
引言57
第1節(jié)基因工程蛋白的原核表達(dá)工程化技術(shù)58
第2節(jié)原核表達(dá)基因工程蛋白的分離純化68
第3節(jié)基因工程蛋白的真核表達(dá)工程化技術(shù)75
第4節(jié)真核表達(dá)基因工程蛋白的分離純化82
參考文獻(xiàn)88

第5章　基因定點(diǎn)突變、基因敲除及微生物分子生物學(xué)鑒定技術(shù)89
引言89
第1節(jié)基因定點(diǎn)突變技術(shù)89
第2節(jié)基于RecA同源重組的基因敲除技術(shù)94
第3節(jié)基于16SrRNA序列分析等相關(guān)技術(shù)鑒定微生物107
參考文獻(xiàn)119

第6章　蛋白質(zhì)雙向電泳、質(zhì)譜鑒定及結(jié)晶技術(shù)120
引言120
第1節(jié)蛋白質(zhì)雙向電泳120
第2節(jié)蛋白質(zhì)的質(zhì)譜鑒定131
第3節(jié)蛋白質(zhì)表達(dá)、純化與結(jié)晶138
參考文獻(xiàn)151

第7章　生物信息學(xué)網(wǎng)絡(luò)資源利用152
引言152
第1節(jié)生物信息數(shù)據(jù)庫152
第2節(jié)核酸與蛋白質(zhì)序列分析158
參考文獻(xiàn)163

附錄164
附錄Ⅰ實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫方法164
附錄Ⅱ?qū)嶒?yàn)室安全守則165
附錄Ⅲ培養(yǎng)基與試劑配制166