分子生物學實驗技術

第1章　核酸分離提取技術1
引言1
第1節(jié)堿裂解法提取質(zhì)粒DNA1
第2節(jié)磁珠法提取質(zhì)粒DNA4
第3節(jié)質(zhì)粒DNA瓊脂糖凝膠電泳及其膠回收7
第4節(jié)E.coli基因組DNA的提取10
第5節(jié)RNA的分離提取14
參考文獻18

第2章　PCR及實時熒光定量PCR技術19
引言19
第1節(jié)DNA序列的PCR擴增19
第2節(jié)實時熒光定量PCR技術測定目標DNA含量24
參考文獻40

第3章　基因工程菌的構建與表達產(chǎn)物鑒定技術41
引言41
第1節(jié)E.coli感受態(tài)細胞的制備、質(zhì)粒DNA重組與轉化41
第2節(jié)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質(zhì)45
第3節(jié)蛋白質(zhì)的Western印跡分析50
參考文獻56

第4章　基因工程蛋白的工程化生產(chǎn)技術57
引言57
第1節(jié)基因工程蛋白的原核表達工程化技術58
第2節(jié)原核表達基因工程蛋白的分離純化68
第3節(jié)基因工程蛋白的真核表達工程化技術75
第4節(jié)真核表達基因工程蛋白的分離純化82
參考文獻88

第5章　基因定點突變、基因敲除及微生物分子生物學鑒定技術89
引言89
第1節(jié)基因定點突變技術89
第2節(jié)基于RecA同源重組的基因敲除技術94
第3節(jié)基于16SrRNA序列分析等相關技術鑒定微生物107
參考文獻119

第6章　蛋白質(zhì)雙向電泳、質(zhì)譜鑒定及結晶技術120
引言120
第1節(jié)蛋白質(zhì)雙向電泳120
第2節(jié)蛋白質(zhì)的質(zhì)譜鑒定131
第3節(jié)蛋白質(zhì)表達、純化與結晶138
參考文獻151

第7章　生物信息學網(wǎng)絡資源利用152
引言152
第1節(jié)生物信息數(shù)據(jù)庫152
第2節(jié)核酸與蛋白質(zhì)序列分析158
參考文獻163

附錄164
附錄Ⅰ實驗報告撰寫方法164
附錄Ⅱ實驗室安全守則165
附錄Ⅲ培養(yǎng)基與試劑配制166