基因工程實驗指南

第一章 儀器設(shè)備 001
分子生物學(xué)實驗室常用儀器設(shè)備簡介 001
第二章 核 酸 009
第一節(jié) 核酸的構(gòu)成 009
第二節(jié) 基因組 DNA 的提取 014
第三節(jié) TENS 法提取微生物基因組 DNA 018
第四節(jié) DNA 的擴增 019
第五節(jié) DNA 片段的瓊脂糖凝膠電泳和回收純化 021
第六節(jié) DNA 重組及鑒定 028
第七節(jié) 核酸分子雜交技術(shù) 031
第八節(jié) Southern blotting 技術(shù) 041
第九節(jié) 植物總 RNA 的提取和檢測 048
第十節(jié) poly（A）+ RNA 的提取 051
第十一節(jié) 無菌感染期線蟲 RNA 的提取 051
第十二節(jié) 果蠅總 RNA 的提取 053
第十三節(jié) 哺乳動物 RNA 的提取 054
第十四節(jié) 反轉(zhuǎn)錄 RNA 055
第十五節(jié) 半定量 PCR 技術(shù) 056
第十六節(jié) 實時熒光定量 PCR 技術(shù) 057
第十七節(jié) Northern bloting 技術(shù) 059
第十八節(jié) 核酸染色 061
第十九節(jié) 雙脫氧鏈終止法測序技術(shù) 064
第二十節(jié) 焦磷酸測序（Pyrosequencing） 066
第二十一節(jié) 核酸信息分析 068


基因工程 實驗指南





第三章 蛋 白 質(zhì) 080
第一節(jié) 定量蛋白質(zhì)組學(xué) 084
第二節(jié) 植物蛋白的提取 085
第三節(jié) 動物蛋白質(zhì)的提取 088
第四節(jié) 動物細胞器蛋白的提取 089
第五節(jié) 細菌蛋白質(zhì)的提取 093
第六節(jié) 原核表達 094
第七節(jié) 用 IPTG 誘導(dǎo)大腸桿菌表達重組綠色熒光蛋白 098
第八節(jié) 蛋白質(zhì)的定量 099
第九節(jié) 聚丙烯酰胺變性凝膠電泳 104
第十節(jié) 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 108
第十一節(jié) 雙向凝膠電泳 110
第十二節(jié) Western bolting 技術(shù) 114
第十三節(jié) 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印實驗 半干式 116
第十四節(jié) 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印實驗 電泳液式 118
第十五節(jié) 蛋白質(zhì)染色 119
第十六節(jié) 染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)（ChIP） 121
第十七節(jié) 凝膠遷移實驗（EMSA） 125
第十八節(jié) 超遷移 EMSA（Super-Shift EMSA） 129
第十九節(jié) 蛋白質(zhì)序列分析 131
第四章 載體構(gòu)建及擴繁 132
第一節(jié) DNA 限制性內(nèi)切酶酶切分析 132
第二節(jié) PCR 產(chǎn)物連接 135
第三節(jié) 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化 136
第四節(jié) 挑菌與搖菌 140
第五節(jié) 保菌 141
第六節(jié) 菌液 PCR 檢測 141
第七節(jié) 質(zhì)粒提取 142
第八節(jié) 質(zhì)粒 DNA 的電泳檢測 145
第九節(jié) ABI3730XL 測序?qū)嶒灣绦?146



　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　目 錄






第十節(jié) 感受態(tài)細胞的制備 151
第十一節(jié) 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 152
第十二節(jié) 基于毛細管電泳的熒光檢測 SSR 實驗程序 153
第五章 蛋白質(zhì)—蛋白質(zhì)相互作用 156
第一節(jié) 目標蛋白的亞細胞定位 156
第二節(jié) 酵母雙雜交 160
第三節(jié) 酵母文庫的篩選 164
第四節(jié) 免疫共沉淀 165
第五節(jié) GST 融合蛋白進行 Pulldow 實驗 168
第六節(jié) 雙分子熒光互補（BiFC） 169
第七節(jié) 熒光共振能量轉(zhuǎn)移
［Fluorescence resonance energy transfer（FRET）］… 175 第八節(jié) Far Western blotting 印跡法 176
第九節(jié) 酵母單雜交實驗 179
第十節(jié) 原生質(zhì)體提取及轉(zhuǎn)化步驟 180
第六章 作物轉(zhuǎn)化 183
第一節(jié) 浸蘸法轉(zhuǎn)化擬南芥 185
第二節(jié) 農(nóng)桿菌侵染法轉(zhuǎn)化煙草 187
第三節(jié) 煙草瞬時表達 190
第四節(jié) 農(nóng)桿菌侵染法水稻 191
第五節(jié) 生理指標的測定 193
第七章 常用試劑的配制 197
第一節(jié) 抗生素溶液的配制 197
第二節(jié) 常用緩沖液的配制 198
第三節(jié) 常用培養(yǎng)基的配制 207
參考文獻 211