銅調(diào)控蛋白CopC探究

第1章銅調(diào)控體系及銅蛋白家族
1.1銅在生物體內(nèi)的必要性和毒性2
1.1.1銅在生物體內(nèi)的必要性2
1.1.2銅的氧化損傷3
1.2銅穩(wěn)態(tài)機(jī)理4
1.2.1細(xì)胞對(duì)銅的吸收4
1.2.2細(xì)胞內(nèi)銅離子的運(yùn)輸載體6
1.3革蘭氏陰性菌的銅抑制體系8
1.4Cop家族9
1.4.1CopC溶液結(jié)構(gòu)10
1.4.2CopC晶體結(jié)構(gòu)及銅配位情況14
參考文獻(xiàn)19
第2章突變體MCopC的構(gòu)建、表達(dá)、純化
2.1MCopC的構(gòu)建26
2.1.1基因體外定點(diǎn)突變主要方法及原理26
2.1.2MCopC的構(gòu)建29
2.2MCopC的誘導(dǎo)、表達(dá)33
2.2.1誘導(dǎo)表達(dá)33
2.2.2菌體的破碎33
2.2.3蛋白濃度測(cè)定(考馬氏亮藍(lán)G250測(cè)定法)33
2.3MCopC的純化33
2.3.1離子交換柱層析原理33
2.3.2DE-52纖維素陰離子交換樹(shù)脂的處理34
2.3.3洗脫34
2.3.4凝膠柱層析原理35
2.4MCopC的檢驗(yàn)35
2.4.1TriGly SDSPAGE分析35
2.4.2紫外譜的測(cè)定36
2.4.3凝膠色譜及質(zhì)譜分析38
2.5結(jié)論39
參考文獻(xiàn)39
第3章CopC色氨酸殘基的特性
3.1CopC的熒光特征42
3.1.1不同激發(fā)波長(zhǎng)下的CopC熒光42
3.1.2突變CopC的熒光42
3.1.3異于Burstein分類(lèi)的蛋白44
3.1.4CopC晶體結(jié)構(gòu)中色氨酸的位置44
3.2酪氨酸和色氨酸間的能量轉(zhuǎn)移45
3.3色氨酸在CopC中所處的環(huán)境47
3.4色氨酸突變對(duì)蛋白性質(zhì)的影響48
3.4.1色氨酸突變對(duì)Cu(Ⅱ)結(jié)合能力的影響48
3.4.2色氨酸突變對(duì)構(gòu)象影響51
3.4.3色氨酸突變對(duì)蛋白熱穩(wěn)定性的影響52
3.5結(jié)論54
參考文獻(xiàn)55
第4章CopC穩(wěn)定性
4.1GuHCl引起的CopC變性58
4.2兩態(tài)模型60
4.2.1光譜參數(shù)變化60
4.2.2熒光相位圖61
4.2.3銅結(jié)合能力變化62
4.3CopC和CopCCu(Ⅱ)穩(wěn)定化能計(jì)算63
4.4解折疊動(dòng)力學(xué)64
4.5其他影響因素67
4.5.1pH影響67
4.5.2溫度的影響68
4.6結(jié)論69
參考文獻(xiàn)70
第5章萘胺類(lèi)化合物對(duì)CopC構(gòu)象的干擾
5.1TNS對(duì)CopC構(gòu)象的干擾74
5.1.1TNS對(duì)CopC構(gòu)象的干擾74
5.1.2TNS與CopC間的作用力78
5.1.3機(jī)理推測(cè)80
5.2α-NA對(duì)CopC構(gòu)象的干擾81
5.2.1α-NA對(duì)CopC構(gòu)象的干擾81
5.2.2NA與CopC作用機(jī)理84
5.3結(jié)論86
參考文獻(xiàn)86
第6章CopC在Cu(Ⅱ)轉(zhuǎn)運(yùn)中的作用
6.1MCopC與CopC-Cu(Ⅱ)反應(yīng)常數(shù)90
6.2MCopC與CopC-Cu(Ⅱ)反應(yīng)熱力學(xué)92
6.3MCopC與CopC-Cu(Ⅱ)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)93
6.4反應(yīng)機(jī)理95
6.4.1CopC-Cu(Ⅱ)與EDTA的反應(yīng)96
6.4.2CopC-Cu(Ⅱ)與CDTA的反應(yīng)97
6.4.3CopC-Cu(Ⅱ)與MCopC的反應(yīng)98
6.5結(jié)論101
參考文獻(xiàn)102
第7章CopC中Cu(Ⅱ)和Cu(Ⅰ)位點(diǎn)協(xié)同性
7.1兩位點(diǎn)協(xié)同性106
7.2結(jié)論110
參考文獻(xiàn)110
第8章CopC與Au(Ⅲ)離子的作用
8.1CopC與Au(Ⅲ)相互作用112
8.1.1Au(Ⅲ)引起CopC熒光猝滅112
8.1.2電勢(shì)變化113
8.1.3Au(Ⅲ)與CopC的結(jié)合常數(shù)114
8.1.4Au(Ⅲ)催化抗壞血酸氧化受CopC的影響118
8.2Au(Ⅲ)結(jié)合對(duì)CopC構(gòu)象的影響119
8.3結(jié)論121
參考文獻(xiàn)121
第9章銅在配合物與CopC間的轉(zhuǎn)運(yùn)
9.1銅配合物\\[Cu(SA)(Phen)Cl·H2O］124
9.1.1銅配合物\\[Cu(SA)(Phen)Cl·H2O\\]結(jié)構(gòu)124
9.1.2配合物光譜特征126
9.1.3配合物與EDTA的反應(yīng)128
9.2銅配合物\\[Cu(SA)(Phen)Cl·H2O\\]與CopC的反應(yīng)129
9.2.1光譜研究129
9.2.2循環(huán)伏安分析132
9.3結(jié)論133
參考文獻(xiàn)133
縮略語(yǔ)134