轉(zhuǎn)基因豬制備技術(shù)

序
前言
第一章 概述
第一節(jié) 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的產(chǎn)生和發(fā)展
一、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的產(chǎn)生
二、動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展
三、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物應(yīng)用領(lǐng)域的拓展
第二節(jié) 轉(zhuǎn)基因豬技術(shù)現(xiàn)狀及應(yīng)用前景
一、轉(zhuǎn)基因豬技術(shù)現(xiàn)狀
二、轉(zhuǎn)基因豬的應(yīng)用現(xiàn)狀與前景
參考文獻(xiàn)
第二章 豬的配子與胚胎操作技術(shù)
第一節(jié) 豬精液的采集、保存和輸精技術(shù)
一、豬精液的采集
二、精液的質(zhì)量檢查和評(píng)定 序 前言 第一章 概述 第一節(jié) 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的產(chǎn)生和發(fā)展 一、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的產(chǎn)生 二、動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展 三、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物應(yīng)用領(lǐng)域的拓展 第二節(jié) 轉(zhuǎn)基因豬技術(shù)現(xiàn)狀及應(yīng)用前景 一、轉(zhuǎn)基因豬技術(shù)現(xiàn)狀 二、轉(zhuǎn)基因豬的應(yīng)用現(xiàn)狀與前景 參考文獻(xiàn) 第二章 豬的配子與胚胎操作技術(shù) 第一節(jié) 豬精液的采集、保存和輸精技術(shù) 一、豬精液的采集 二、精液的質(zhì)量檢查和評(píng)定 三、精液的保存 四、輸精技術(shù) 第二節(jié) 母豬的同期發(fā)情和超數(shù)排卵技術(shù) 一、母豬的同期發(fā)情技術(shù) 二、母豬的超數(shù)排卵技術(shù) 第三節(jié) 豬胚胎的采集和移植技術(shù) 一、胚胎的采集 二、胚胎的移植 第四節(jié) 豬卵母細(xì)胞體外成熟及體外受精技術(shù) 一、豬卵母細(xì)胞的采集 二、豬卵母細(xì)胞的體外成熟 三、豬精子的體外獲能 四、體外受精技術(shù) 五、胞質(zhì)內(nèi)單精注射技術(shù) 第五節(jié) 豬體細(xì)胞核移植(克隆)技術(shù) 一、供體細(xì)胞的選擇 二、供體細(xì)胞的制備方法 三、受體細(xì)胞的制備 四、核移植操作技術(shù) 五、融合及激活技術(shù) 六、手工克隆技術(shù) 七、重構(gòu)胚的培養(yǎng) 八、重構(gòu)胚的移植 九、豬體細(xì)胞核移植存在的問(wèn)題及應(yīng)用前景 第六節(jié) 豬的iPS技術(shù) 一、iPS細(xì)胞的制備技術(shù) 二、豬iPS技術(shù)的應(yīng)用前景 三、iPS細(xì)胞目前存在的問(wèn)題 第七節(jié) 配子與胚胎操作的環(huán)境控制 一、影響配子與胚胎操作的環(huán)境因素 二、滅菌技術(shù) 三、玻璃及塑料制品的清洗 四、配子與胚胎操作室的設(shè)計(jì)及環(huán)境管理 參考文獻(xiàn) 第三章 豬的基因工程技術(shù) 第一節(jié) 轉(zhuǎn)基因豬表達(dá)載體的構(gòu)建 一、目的基因及其全長(zhǎng)序列的獲取 二、啟動(dòng)子的選擇 三、報(bào)告基因 四、調(diào)控元件 五、動(dòng)物基因工程常用載體 六、載體構(gòu)建的一般流程 第二節(jié) 基因打靶技術(shù)及其策略 一、基因打靶載體的類型和構(gòu)建方法 二、胚胎干細(xì)胞基因打靶 三、體細(xì)胞基因打靶 四、基因打靶技術(shù)的發(fā)展及復(fù)雜調(diào)控 五、基因打靶技術(shù)的應(yīng)用和展望 第三節(jié) RNAi基因沉默載體的構(gòu)建 一、RNAi的研究 二、RNAi的分子機(jī)制 三、shRNA表達(dá)載體構(gòu)建 四、基因沉默技術(shù)在豬遺傳改良上的應(yīng)用 第四節(jié) 其他豬基因組靶向修飾技術(shù) 一、鋅指核酸酶 二、TALEN 三、PhiC31整合酶 參考文獻(xiàn) 第四章 豬的轉(zhuǎn)基因技術(shù) 第一節(jié) 顯微注射法 一、原核胚的獲取 二、基因的顯微注射 三、注射胚的移植 四、原核注射法制備轉(zhuǎn)基因豬的效率 五、提高轉(zhuǎn)基因效率的措施 六、通過(guò)顯微注射法實(shí)現(xiàn)基因的定位修飾和整合 第二節(jié) 豬精子介導(dǎo)法 一、精子介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因的機(jī)理 二、精子介導(dǎo)制備轉(zhuǎn)基因豬的方法 第三節(jié) 體細(xì)胞核移植介導(dǎo)法 一、供體細(xì)胞的選擇及建系 二、細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)染 三、細(xì)胞篩選和陽(yáng)性單克隆培養(yǎng) 第四節(jié) 逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法 一、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建 二、利用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體制備轉(zhuǎn)基因豬的路徑 第五節(jié) 其他制備轉(zhuǎn)基因豬的方法 一、精原干細(xì)胞途徑 二、人工染色體技術(shù) 參考文獻(xiàn) 第五章 轉(zhuǎn)基因豬的檢測(cè) 第一節(jié) 可視化識(shí)別檢測(cè) 一、熒光標(biāo)記 二、膚色標(biāo)記 第二節(jié) 整合檢測(cè) 一、樣品的采集 二、DNA的提取 三、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR) 四、DNA斑點(diǎn)雜交 五、Southerln印記雜交 六、外源基因整合位點(diǎn)的檢測(cè)染色體原位雜交技術(shù) 七、轉(zhuǎn)基因整合拷貝數(shù)的測(cè)定 第三節(jié) 轉(zhuǎn)基因豬外源基因的轉(zhuǎn)錄分析mRNA檢測(cè) 一、組織或細(xì)胞中總RNA提取 二、Northern印跡雜交 三、RNase保護(hù)分析 四、逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RTPCR) 五、RNA斑點(diǎn)雜交 第四節(jié) 轉(zhuǎn)基因豬翻譯水平蛋白質(zhì)產(chǎn)物檢測(cè) 一、蛋白質(zhì)印跡技術(shù) 二、免疫組織化學(xué)檢測(cè) 第五節(jié) 轉(zhuǎn)基因豬表達(dá)產(chǎn)物的生物活性分析及功能測(cè)試 一、表達(dá)產(chǎn)物的生物活性分析 二、表達(dá)產(chǎn)物的功能測(cè)試 參考文獻(xiàn) 第六章 轉(zhuǎn)基因豬的安全調(diào)控技術(shù) 第一節(jié) 轉(zhuǎn)基因豬的安全性分析及解決方案 一、轉(zhuǎn)基因豬對(duì)食品均安全性分析及解決方案 二、轉(zhuǎn)基因豬對(duì)環(huán)境的安全性分析及解決方案 三、轉(zhuǎn)基因豬自身的安全性分析及解決方案 第二節(jié) 標(biāo)記基因的刪除技術(shù) 一、hit and run法 二、雙置換法 三、位點(diǎn)特異性重組技術(shù) 第三節(jié) 組織特異性表達(dá) 第四節(jié) 外源基因的誘導(dǎo)表達(dá) 一、四環(huán)素誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng) 二、蛻皮激素誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng) 三、他克莫司／雷帕霉素誘導(dǎo)系統(tǒng) 四、RU486誘導(dǎo)系統(tǒng) 參考文獻(xiàn) 第七章 轉(zhuǎn)基因豬新品種培育 第一節(jié) 外源基因在G0代中的整合狀況及遺傳穩(wěn)定性 一、隨機(jī)整合 二、定位整合 第二節(jié) G0代轉(zhuǎn)基因豬的選擇 一、選擇的內(nèi)容和目標(biāo) 二、選擇程序 第三節(jié) 轉(zhuǎn)基因豬純合子的建立 一、通過(guò)常規(guī)繁育技術(shù)建立轉(zhuǎn)基因豬純合子 二、通過(guò)重復(fù)打靶技術(shù)建立轉(zhuǎn)基因豬純合子 三、基因編輯技術(shù) 第四節(jié) 轉(zhuǎn)基因豬新品種的培育 一、轉(zhuǎn)基因豬新品種的培育目標(biāo) 二、轉(zhuǎn)基因豬新品系的建立 三、轉(zhuǎn)基因豬新品種的建立 四、轉(zhuǎn)基因豬新品種的利用 五、轉(zhuǎn)基因豬種質(zhì)資源的保存 參考文獻(xiàn) 第八章 轉(zhuǎn)基因豬的安全管理和安全評(píng)價(jià) 第一節(jié) 我國(guó)農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物的安全管理體系 一、我國(guó)農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全管理的法規(guī)建設(shè) 二、我國(guó)農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物的管理和監(jiān)控體系 第二節(jié) 轉(zhuǎn)基因豬的安全控制 一、轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)豬場(chǎng)的安全控制 二、轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)豬場(chǎng)的衛(wèi)生防疫 三、轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)豬場(chǎng)豬群處置規(guī)則 第三節(jié) 轉(zhuǎn)基因豬的安全評(píng)價(jià) 一、轉(zhuǎn)基因豬安全評(píng)價(jià)的內(nèi)容 二、各階段的申報(bào)程序 參考文獻(xiàn)