基因克隆技術(shù)在制藥中的應(yīng)用

上篇技術(shù)篇
第一章 基因克隆技術(shù)概述1
第一節(jié)基因克隆技術(shù)1
一、基因克隆技術(shù)的誕生和興起1
二、基因克隆技術(shù)的特點(diǎn)與步驟3
第二節(jié)基因克隆技術(shù)早期開(kāi)創(chuàng)性研究成就5
第二章 基因克隆技術(shù)制藥中常用的工具酶8
第一節(jié)限制性核酸內(nèi)切酶8
一、限制酶的發(fā)現(xiàn)8
二、限制酶的類(lèi)型9
三、限制酶的命名10
四、Ⅱ型限制酶的特性10
五、DNA的單酶切與限制片段末端連接13
第二節(jié)DNA連接酶14
一、DNA連接酶連接作用的特點(diǎn)14
二、基因工程中常用的連接酶14
三、DNA連接酶連接作用的分子機(jī)理15
第三節(jié)DNA聚合酶16
一、大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ16
二、Klenow大片段酶18
三、T4噬菌體DNA聚合酶19
四、經(jīng)修飾的T7噬菌體DNA聚合酶19
五、TaqDNA聚合酶及AmpliTaqTMDNA聚合酶20
六、反轉(zhuǎn)錄酶20
第四節(jié)DNA修飾酶21
一、末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶21
二、堿性磷酸酶21
三、T4噬菌體多核苷酸激酶22
第五節(jié)單鏈核酸內(nèi)切酶22
一、S1核酸酶22
二、Bal31核酸酶23
第六節(jié)核酸外切酶24
一、核酸外切酶Ⅶ24
二、核酸外切酶Ⅲ24
三、λ核酸外切酶25
第三章 基因克隆技術(shù)制藥常用質(zhì)粒載體26
第四章 基因克隆技術(shù)制藥常用噬菌體載體43
第五章 基因工程藥物目的基因制取65
第六章 目的基因與克隆載體的體外重組83
第七章 重組克隆載體引入受體細(xì)胞95
第八章 目的重組克隆的篩選、鑒定與分析104
第九章 目的基因在宿主細(xì)胞中的表達(dá)127
第十章 基因克隆技術(shù)制藥概述151
下篇 應(yīng)用篇
第十一章 生物藥物基因的克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá)163
第十二章 生物藥物基因的克隆及其在酵母菌中的表達(dá)188
第十三章 生物藥物基因的克隆及其在昆蟲(chóng)中的表達(dá)194
第十四章 生物藥物基因的克隆及其在動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)200
第十五章 基因工程菌和工程細(xì)胞的培養(yǎng)與發(fā)酵215
第十六章 基因工程藥物的分離純化229
第十七章 基因工程藥物的分析與檢驗(yàn)241
附錄1 干擾素效價(jià)測(cè)定(細(xì)胞病變抑制法)263
附錄2 重組人白細(xì)胞介素2效價(jià)測(cè)定(CTLL2依賴(lài)細(xì)胞株/MTT比色法）265
附錄3 EPO體內(nèi)活性測(cè)定(網(wǎng)織紅細(xì)胞法)266
附錄4 EPO純度測(cè)定(HPLCSEC法)267
附錄5 CHO細(xì)胞蛋白殘留量測(cè)定(ELISA法)268
附錄6 rhGCSF效價(jià)測(cè)定(NFS60依賴(lài)株/MTT比色法)269
主要參考文獻(xiàn)270